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博落回中四种生物碱的薄层鉴别研究

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  • 作者:陈燕乐
  • 来源:
  • 发布时间:2020-05-28 11:15
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【概要描述】博落回散作为一种二类新中兽药,是从博落回中提取,而博落回中的主要成分就是生物碱,下面就一起看一下关于博落回中四种生物碱的薄层鉴别研究,结果表明建立的薄层方法简便,准确和稳定,可以用于控制博落回药材的质量。

博落回中四种生物碱的薄层鉴别研究

【概要描述】博落回散作为一种二类新中兽药,是从博落回中提取,而博落回中的主要成分就是生物碱,下面就一起看一下关于博落回中四种生物碱的薄层鉴别研究,结果表明建立的薄层方法简便,准确和稳定,可以用于控制博落回药材的质量。

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该文章已发表于中国兽药杂志2020年4月第54卷第4期

 

[摘 要]

建立博落回药材中四种生物碱的薄层色谱(TLC)鉴别方法。开展利用二甲苯-甲醇(5∶1)展开剂分离鉴别博落回中的原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱;利用氯仿-二甲苯-甲醇-氨水(50:10:1:0.1)展开剂分离鉴别博落回中血根碱和白屈菜红碱;利用环己烷-丙酮(3∶2)展开剂分离鉴别博落回中原阿片碱和别隐品碱的系统研究。结果表明建立的薄层方法简便,准确和稳定,可以用于控制博落回药材的质量。

 

[关键词]

博落回;生物碱;薄层鉴别

 

博落回是一种以生物碱为主要活性成份的民间传统中药,具有散瘀、祛风、解毒、止痛及杀虫等功效[1]。该植物为罂粟科博落回属的多年生草本植物,全属共两种,包括博落回Macleaya cordata(Willd.)R.Br. 与小果博落回(Macleaya microcarpa(Maxim.)Fedde),以博落回应用为主,但小果博落回也作博落回使用[1~2]。博落回中的主要生物碱为原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱这四种生物碱,富集于博落回的果荚和叶片中。博落回散和博落回注射液都是以博落回果荚为原料进行开发的新兽药,其它药用部位现在也在进行系列产品开发。目前应用液相方法检测生物碱在博落回各个部位中的含量报道很多[3~6],未见报道相关的薄层方法定性鉴别,但在博落回药材质量检测中薄层鉴定也有很重要的意义,故对博落回各个部位中四种生物碱进行薄层鉴别研究。

 

1 材料

1.1 仪器  

超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);十万分之一电子天平(梅托勒-托利仪器(上海)有限公司);紫外三用仪(杭州齐威仪器有限公司);硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂);微量点样管;玻璃喷雾瓶;双槽玻璃展开缸。

1.2 试剂与药品  

原阿片碱(110853-201805),血根碱(510001-201101),白屈菜红碱(111718-201402)均购自中国药品检验研究院;别隐品碱(170501,湖南美可达生物资源股份有限公司自制);甲醇、盐酸、二甲苯、氯仿、环已烷、丙酮、氨水和碘化铋钾均为分析纯试剂。博落回果、博落回叶、小果博落回果及小果博落回叶均来自湖南美可达生物资源股份有限公司采购,由湖南中医药大学杨广民教授分别鉴定来源于博落回Macleaya cordata(Willd.)R.Br. 与小果博落回(Macleaya microcarpa(Maxim.)Fedde)。

 

2 方法与结果

2.1 博落回供试品溶液

2.1.1 博落回果供试品溶液

取博落回果粉末0.5 g,加甲醇-1%盐酸水溶液(50∶50)10 mL,超声处理1小时,滤过,滤液作为供试品溶液。

2.1.2 博落回叶供试品溶液

取博落回叶粉末0.5 g,加甲醇-1%盐酸水溶液(50∶50)25 mL,超声处理1小时,滤过,滤液作为供试品溶液。

2.1.3 小果博落回果供试品溶液

取小果博落回果粉末0.5 g,加甲醇-1%盐酸水溶液(50∶50)25 mL,超声处理1小时,滤过,滤液作为供试品溶液。

2.1.4 小果博落回叶供试品溶液

取小果博落回叶粉末1 g,加甲醇-1%盐酸水溶液(50∶50)10 mL,超声处理1小时,滤过,滤液作为供试品溶液。

2.2 对照品溶液

分别取原阿片碱,别隐品碱,血根碱和白屈菜红碱对照品,加甲醇-1%盐酸水溶液(50∶50)制成每1 mL分别含原阿片碱1 mg,别隐品碱1 mg,血根碱1 mg和白屈菜红碱1 mg的溶液,作为对照品溶液。

2.3 实验结果

2.3.1 二甲苯-甲醇

照薄层色谱法(附录0502)试验,吸取上述4种生物碱对照品溶液,各样品供试品溶液各2 µL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以二甲苯-甲醇(5∶1)为展开剂,置氨蒸气饱和的展开缸内,立即展开,取出,晾干。在可见光下(图1),原阿片碱和别隐品碱不显色,血根碱和白屈菜红碱分别显红色和黄色,博落回果和小果博落回叶供试品溶液在血根碱和白屈菜红碱相应位置显相同颜色的斑点;在254 nm荧光下(图2),原阿片碱和别隐品碱无荧光,博落回果和小果博落回叶供试品溶液在血根碱和白屈菜红碱相应位置显明显的相同颜色的荧光斑点,博落回叶和小果博落回果供试品溶液在血根碱和白屈菜红碱相应位置显较弱的荧光斑点;喷碘化铋钾试液后(图3),博落回果供试品溶液在和原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱对照品相应位置上显相同颜色的斑点,博落回叶供试品溶液在和原阿片碱、别隐品碱相应位置上显相同颜色的斑点,小果博落回果供试品溶液在和别隐品碱对照品相应位置上显相同颜色的斑点,小果博落回叶供试品溶液在和血根碱、白屈菜红碱和别隐品碱对照品相应位置上显相同颜色的斑点。

 

点样从左到右依次为:

(1)原阿片碱;(2)别隐品碱;(3)血根碱;(4)白屈菜红碱;(5)博落回果;(6)博落回叶;(7)小果博落回果;(8)小果博落回叶

图1博落回TLC图谱(日光下)

Fig1  TLC chromatogram of Macleaya cordata and M. microcarpa(sunlight)

 

点样从左到右依次为:

(1)原阿片碱;(2)别隐品碱;(3)血根碱;(4)白屈菜红碱;(5)博落回果;(6)博落回叶;(7)小果博落回果;(8)小果博落回叶

图2博落回TLC图谱(254 nm荧光)

Fig2  TLC chromatogram of Macleaya cordata and M. microcarpa(UV254nm)

 

 

点样从左到右依次为:

(1)原阿片碱;(2)别隐品碱;(3)血根碱;(4)白屈菜红碱;(5)博落回果;(6)博落回叶;(7)小果博落回果;(8)小果博落回叶

图3博落回TLC图谱(碘化铋钾试液显色)

Fig3  TLC chromatogram of Macleaya cordata and M. microcarpa(react with Iodized bismuth potassium solution )

 

2.3.2 环已烷-丙酮

照薄层色谱法(附录0502)试验,吸取上述原阿片碱和别隐品碱对照品溶液,各样品供试品溶液各2 µL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环已烷-丙酮(3∶2)为展开剂,置氨蒸气饱和的展开缸内,立即展开,取出,晾干,喷碘化铋钾试液后(图4),博落回果和博落回叶供试品溶液在原阿片碱和别隐品碱对照品相应位置上显相同颜色的斑点,小果博落回果和小果博落回叶供试品溶液在别隐品碱相应位置上显相同颜色的斑点。 

 

点样从左到右依次为:

(1)原阿片碱;(2)别隐品碱;(3)博落回果;(4)博落回叶;(5)小果博落回果;(6)小果博落回叶

图4博落回TLC图谱(碘化铋钾试液显色)

Fig4  TLC chromatogram of Macleaya cordata and M. microcarpa(react with Iodized bismuth potassium solution )

 

2.3.3 氯仿-二甲苯-甲醇-氨水(50:10:1:0.1)

照薄层色谱法(附录0502)试验,吸取上述4种生物碱对照品溶液,各样品供试品溶液各2 µL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-二甲苯-甲醇-氨水(50:10:1:0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,在可见光下(图5),原阿片碱和别隐品碱不显色,血根碱和白屈菜红碱分别显红色和黄色,博落回果和小果博落回叶供试品溶液在血根碱和白屈菜红碱相应位置显相同颜色的斑点;在254 nm荧光下(图6),原阿片碱和别隐品碱无荧光,博落回果和小果博落回叶供试品溶液在血根碱和白屈菜红碱相应位置显明显的相同颜色的荧光斑点,博落回叶和小果博落回果供试品溶液在血根碱和白屈菜红碱相应位置显较弱的荧光斑点;喷碘化铋钾试液后(图7),博落回果和小果博落回叶供试品溶液在和血根碱、白屈菜红碱对照品相应位置上显相同颜色的斑点,原阿片碱对照品展开很小的距离,别隐品碱对照品基本上不展开,博落回果、博落回叶和小果博落回叶供试品溶液在和原阿片碱对应位置上显相同颜色的斑点。

 

点样从左到右依次为

(1)原阿片碱;(2)别隐品碱;(3)血根碱;(4)白屈菜红碱;(5)博落回果;(6)博落回叶;(7)小果博落回果;(8)小果博落回叶

图5博落回TLC图谱(可见光)

Fig5  TLC chromatogram of Macleaya cordata and M. microcarpa(sunlight )

 

点样从左到右依次为:

(1)原阿片碱;(2)别隐品碱;(3)血根碱;(4)白屈菜红碱;(5)博落回果;(6)博落回叶;(7)小果博落回果;(8)小果博落回叶

图6博落回TLC图谱(254 nm)

Fig6  TLC chromatogram of Macleaya cordata and M. microcarpa(UV254nm)

 

 

点样从左到右依次为:

(1)原阿片碱;(2)别隐品碱;(3)血根碱;(4)白屈菜红碱;(5)博落回果;(6)博落回叶;(7)小果博落回果;(8)小果博落回叶

图7博落回TLC图谱(碘化铋钾试液显色)

Fig7  TLC chromatogram of Macleaya cordata and M. microcarpa(react with Iodized bismuth potassium solution )

 

3 结论与讨论

3.1 实验结论

3.1.1 博落回果薄层鉴定条件

取本品粉末0.5 g,加甲醇-1%盐酸水溶液(50∶50)10 mL,超声处理1 小时,滤过,滤液作为供试品溶液。另取血根碱盐酸盐和白屈菜红碱对照品,加甲醇-1%盐酸水溶液(50∶50)制成每1 mL各含血根碱1 mg和白屈菜红碱1 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验,吸取上述三种溶液各2 µL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-二甲苯-甲醇-氨水(50:10:1:0.1)为展开剂,置氨蒸气饱和的展开缸内,立即展开,取出,晾干,喷碘化铋钾试液显色,供试色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

3.1.2 博落回叶薄层鉴定

取本品粉末0.5 g,加甲醇-1%盐酸水溶液(50∶50)25 mL,超声处理1小时,滤过作为供试品溶液。取原阿片碱和别隐品碱对照品,加甲醇制成每1 mL各含原阿片碱 1 mg和别隐品碱1 mg的混合溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验,吸取上述三种溶液各2 µL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-丙酮(2∶1)为展开剂,置氨蒸气饱和的展开缸内,展开,取出,晾干,喷碘化铋钾试液显色,供试色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。

3.1.3 小果博落回果薄层鉴定

取本品粉末0.5 g,加甲醇-1%盐酸水溶液(50∶50)25 mL,超声处理60分钟,滤过,滤液作为供试品溶液。另取别隐品碱对照品,加甲醇制成1 mL约含0.4 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验,吸取上述两种溶液各 3 µL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-丙酮(3∶2)为展开剂,置氨蒸气饱和的展开缸内,展开,取出,晾干,喷碘化铋钾试液显色,供试色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。

3.1.4 小果博落回叶薄层鉴定

取本品粉末约1 g,加甲醇-1%盐酸水溶液(50∶50)10 mL,超声处理60分钟,滤过,滤液作为供试品溶液。另取血根碱盐酸盐和白屈菜红碱对照品,加甲醇-1%盐酸水溶液(50∶50)分别制成每1 mL含血根碱1 mg和白屈菜红碱1 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验,吸取上述三种溶液各2 µL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-二甲苯-甲醇-氨水(50:10:1:0.1)为展开剂,置氨蒸气饱和的展开缸内,立即展开,取出,晾干,喷碘化铋钾试液显色,供试色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

 

3.2 讨论

3.2.1   博落回中的四种生物碱在各个部位都有分布,但是含量相差较大。博落回果中以血根碱和白屈菜红碱为主,博落回叶中以原阿片碱和别隐品碱为主,小果博落回果中以别隐品碱为主,而小果博落回叶中以血根碱和白屈菜红碱为主,故薄层定性鉴别以主要成份为鉴别特征。

3.2.2   原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱这种四种生物碱遇碘化铋钾试液显红色;血根碱和白屈菜红碱这两种生物碱在可见光下分别显红色和黄色,在254nm紫外光下有荧光,但是原阿片碱和别隐品碱在可见光下没有颜色,紫外光下也没有荧光,故以碘化铋钾试液显色为好。

3.2.3   氯仿-二甲苯-甲醇-氨水(50:10:1:0.1)系统能较好的分离血根碱和白屈菜红碱;环己烷-丙酮(3∶2)能较好的分离原阿片碱和别隐品碱;二甲苯-甲醇(5∶1)能较好的分离四种生物碱,但是血根碱和白屈菜红碱分离不算特别好,原阿片碱和别隐品碱的比移值(Rf)比较小。

3.2.4 兽药国家标准收载的博落回注射液质量标准[7]中,使用氯仿-甲醇-氨水(60:1:0.1)系统,博落回总碱作为对照,展距为5 cm。我们经过液相和薄层鉴别,博落回总碱中主要含有血根碱和白屈菜红碱,该系统能对血根碱和白屈菜红碱进行较好的分离,但是斑点有拖尾,我们在该展开剂的基础上增加二甲苯能有效降低拖尾现像。

3.2.5 湖南省地标《博落回叶》[8]薄层中曾使用环己烷-丙酮(2∶1)分离鉴定原阿片碱和别隐品碱。该标准也是我公司研究申报的,在后续的研究中发现样品溶液不用经过萃取也能较好的鉴别出生物碱成份。经过后期的研究,我们公司对博落回叶薄层条件进行了简化和优化。

 

参考文献

[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会,中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,1998:2272-2273.

Editorial board of Chinese Materia Medica,State Administration of Traditional Chinese Medicine,Chinese Materia Medica[M].Shanghai: Shanghai Science and Technology Press, 1998:2272-2273.

[2]全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编(上册〕[M].第2版.北京:人民卫生出版社,2000:480.

National compilation group of  Chinese herbal medicine.  National compilation of Chinese herbal medicine (Volume I) [M]. 2nd Edition. Beijing: People's Medical Publishing House, 2000:480

[3]刘秀斌,黄嘉璐,郑亚杰,等.博落回和小果博落回不同部位中生物碱类成分的比较[J].中国现代中药,2017, 19(10):1382-1386.

Liu X B,Huang J L,Zheng Y J,et al.Differentiation of Alkaloids in Different Parts between Macleaya cordata and M. microcarpa[J].Modern Chinese Medicine,2017, 19(10):1382-1386.

[4]黄敬,曾建国,罗卫梅. HPLC法同时测定博落回不同部位原阿片碱、别隐品碱的含量[J].湖南中医药大学学报,2010,30(1):41-42.

Huang J,Zeng J G,Luo W M,et al.Determination of protopine and allocrytopine in diferent parts of Macleaya cordata(willd.)R.Br.by HPLC[J].Journal of Traditional Chinese Medicine University of Hunan,2010,30(1):41-42.

[5]郭宇鸽,曾建国,谈满良,等.博落回叶与小果博落回叶中4种生物碱的含量比较[J].中南药学,2011,9(11):829-832.

Guo Y G,Zeng J G,Tan M L,et al.Content of 4 alkaloids in leaves of Macleaya microcarpa(Maxim)Fedde and Macleaya Cordate(Willd.)R.Br.[J].Central South Pharmacy,2011,9(11):829-832.

[6]李文亮,曾建国,刘发宝,等.一测多评法测定博落回果实中原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱的含量[J].湖南中医药大学学报,2011,31(7):25-28. 

Li W L,Zeng J G,Liu F B,et al.Contents determination of protopine,allocryptopine,

sanguinarine and chelerythrine in fruit of Macleaya cordata with method of multi-assay depending on one determination[J].Journal of Traditional Chinese Medicine University of Hunan,2011,31(7):25-28.

[7]中国兽药典委员会编写组. 兽药国家标准(化学药品、中药卷)[S].北京:化学工业出版社,2013:259-260.

Commission of Chinese Veterinary Pharmacopoeia.National standards for veterinary drugs (volume of chemical and traditional Chinese medicine )[S].Beijing: Chemical Industry Publishing House,2013:259-260.

[8]DB43/T 498-2009.博落回叶[S]2009.

DB43/T 498-2009.Folium Macleayae cordatae[S]2009.

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